La preparación es hipocampo de ratón (concretamente CA1). La fluorescencia en verde corresponde a la expresión por parte de muchas células principales, de una forma de la proteína fluorescente de medusa bajo la expresión del promotor Thy-1 (es decir es un animal transgénico), la flourescencia en rojo es una inmunocitoquímica para parvalbumina (una proteína que se expresa en un tipo concreto de interneurona). Además, hay una inmunocitoquímica para el proto-oncogén de expresión nuclear c-Fos, que no es visible, ya que habría que usar el infrarrojo y, por tanto, no es visible al ojo humano, con lo que no es visible en este tipo de microscopio, aunque sí en un microscopio confocal que es con lo que se estudió realmente la preparación.
Hola Profesor, disculpe, estuvo viendo que hay "láminas cubre cámara de Neubauer", ¿es indispensible utilizar estos cubreobetos o un cubreobjetos normal sirve igual de bien? y una pregunta más ¿Si voy a usar un colorante en la visualización recomienda lavar con alcohol o solo con agua? Mil gracias por el vídeo
Hola, un cubreobjeto normal es perfectamente válido. Los cubreobjetos normales son lo bastante rígidos como para alterar poco la medida (ya de por sí, imprecisa). La única precaución es que sean del tamaño adecuado (los cuadrados de 24x24 mm, van bien). Los colorantes aplicados a las células en solución son hidrosolubles (por ejemplo, trypan blue), así que el alcohol no haría falta, pero si lo quieres usar (por ejemplo por desinfectar) no veo inconveniente. Lo que no hay que hacer nunca es frotar. En caso de que se haya secado y haya que tomar medidas más drásticas, un ligero sonicado en baño debería ser suficiente. Si no hay sonicador, dejarlo a remojo en agua jabonosa una noche y enjuagar abundantemente debería ser suficiente. Un saludo
Muchas gracias por la informacion. En el labroatorio BIOMET tenemos un microscopio de fluorescencia. Donde puedo conocer sobre las preparaciones, las concentraciones de cada uno de los fluorocromos. Ojala fuera posible conocerlo, muy amable de antemano.
Hola Roxana, lo tendré en cuenta para futuros videos. ¿BIOMET de la Universidad de Valencia? Lo principal es qué tipos de filtros tenéis en el microscopio, ya que los fluorocromos que podéis usar dependen de ellos. También necesitáis tener una cámara digital conectada a él. En cuanto a la concentración de los anticuerpos fluorescentes, está muy estandarizada por todas las casas comerciales. La dilución recomendada siempre es 1:200, aunque normalmente podéis usarlos 1:400 o 1:800 sin problemas, si queréis ahorrar.
Hola Mariel. Las figuras vienen casi todas de Lodish et al. Molecular cell biology. 4ª edición, si mal no recuerdo. En cuanto al contenido, viene de lecturas varias de la literatura científica y de mi experiencia como investigador, sobre todo en la generación de neuronas postnatales en el giro dentado de la formación hipocámpica. En este video no he seguido ninguna fuente al pie de la letra, ya que discrepan mucho en como usan la terminología.
Subiré un video (está en proceso) con las explicaciones completas y como fabricarlo (son ideas para que las desarrollen los alumnos con materiales ordinarios). En resumen, el aire de la botella (750 ml) se calienta o enfría poniendo agua caliente o fría en un bote de cristal donde está metida. El tubo conecta con una pipeta donde he cerrado la parte superior con pegamento y donde he puesto una gota de caldo de remolacha, dejando en total 2 ml de aire (despreciable frente a los 750 ml). La pipeta siempre permanece a temperatura ambiente. Como el aire esta totalmente prisionero, al calentarse no puede expandirse, pero sí aumentar la presión (Ley de Gay-Lussac). Esa presión se comunica por el tubo y oprime esos 2ml (que como están bloqueados por la gota, sí pueden cambiar de volumen (Ley de Boyle y Mariotte). De ese modo, el cambio de altura del menisco de la gota es traducible a un aumento de presión. La temperatura sube un 30C, como la temperatura ambiente en grados Kelvin (T absoluta) es sobre 300C, eso representa una 10% de cambio, que es aproximadamente lo que detecta la pipeta de 2 ml a unos 1,8 ml, es decir una reducción de 0,2 ml sobre un 10%.
Sí. Eso mide la fuerza sobre el émbolo de la jeringa. La presión es la fuerza repartida por la superficie. En la última gráfica también considero la presión de 1 atm sobre la superficie. Las otras partes de la jeringa no importan porque devuelven la misma fuerza que reciben. Estos videos son de experimentos diseñados para que los realicen los alumnos con material básico fácilmente accesible, de ahí las botellas y la balanza de cocina. Si quieres la explicación detallada puedes verla en el video del link. ru-vid.com/video/%D0%B2%D0%B8%D0%B4%D0%B5%D0%BE-Ita7IRT6S5k.html
EL LIQUIDO TIENE QUE CUBRIR TODO EL CUBREOBJETO HASTA LO HUNDIDO EN LA LINEA,NO VI MUY BIEN,O SOLO SE COLOCA EN LA PARTE DEL MEDIO, CUANTO DEBO COLOCAR.
El líquido entra por capilaridad y rellenas las dos mesetas en cuanto las toca (fíjate de 3:04 a 3:06 en alta resolución y a cámara lenta y verás como se llena). Una vez lo haga, no hace falta añadir más. Nunca llenar las hendiduras completamente o el cubreobjetos podría flotar y habría más de 100 micras. Fíjate en 7:52 como todavía queda aire por llenar. Es más fácil de hacer, que de explicar. Sobre 250 microlitros debe ser suficiente.
Donde puedo conseguir información sobre la falta de ISOLEUCINA genéticamente relacionada con la clatrina Gen 🧬 CLTC Muchas gracias por la información,muy valiosa
Buenas.. Mí hijo tiene genéticamente la falta de ISOLEUCINA relacionada con la clatrina Gen CLTC en heterocigosis Como podría ayudarle para mejorar su calidad de vida Gracias 🫂
Hola. Yo no soy médico, sólo biólogo celular y no me siento capacitado para opinar. Posiblemente ese tipo de cadena de clatrina no funcione bien al tener mutado ese aminoácido. Por otro lado, la mitad de las CLTC están bien y quizá que los otros tipos de clatrina puedan compensar la función. Lo siento, os deseo lo mejor.
Hay figuras de varias fuentes. Versiones antiguas del Alberts, (Alberts et al., Molecular biology of the cell. 6th edition. Garland Science (2014)) Versiones antiguas del Darnell, (Lodish et al. Molecular cell biology. 8th edition. MH Freeman (2016) ) Articulos del Trends in Cell Biology. Fotos de Rhodin. Histology: a Text and Atlas. Oxford University Press (1974) y alguno más, me temo.
Buena pregunta. Lo de los endosomas es algo muy conveniente, pero difíciles de definir. De los endosomas salen vesículas de clatrina, posiblemente distintas de las que se forman en la red del Golgi trans y de las que se forman en membrana plasmática. Su destino no está definido, pero seguramente vuelvan su contenido al Golgi, bien directa o indirectamente. Para verlo con más detalle: "A novel class of clathrin-coated vesicles budding from endosomes" J Cell Biol. 1996 Jan;132(1-2):21-33. doi: 10.1083/jcb.132.1.21.
Buenos días, me encuentro en madrid y estos intentando conseguir azul de toluidina. No encuentro proveedor que me lo venda. Me podría decir como lo podría conseguir por favor? Tengo un proyecto con una alumna de instituto. Gracias
Nosotros compramos el de Panreac a un distribuidor local. Cualquier distribuidor de productos de laboratorio de Madrid debería poder suministrároslo. Normalmente da para mucho y es sucio de preparar (mancha mucho y no se van las manchas), si es para algo puntual yo me podría en contacto con el departamento de histología de la alguna de las universidades de Madrid (nosotros estamos en Valencia y os pilla un poco lejos desafortunadamente). Estoy seguro de que os darán la cantidad que necesitéis, ya que es común y se suele tener preparado. Por ejemplo el departamento de anatomía, histología y neurociencia de la UAM. Además, allí os podrán aconsejar el modo de preparación pues se puede preparar de distintos modos según el propósito concreto. Según lo que queráis hacer también podéis sustituirlo por otros colorantes (por ejemplo, violeta de cresilo, u otros)
Por cierto, considerando el video, si es para teñir mitosis de raíz, te recomiendo Hematoxilina como colorante, es mucho más fácil de utilizar. Yo uso azul de tolouidina con borax porque es uno de los pocos colorantes que pueden teñir mis cortes, pero no son cortes normales.
Mi estudiante y yo soñamos con este tipo de coloración en las raíces de su proyecto para que aprenda un poquito más. Creo que necesitamos incluir en parafina o gelatina y cortar con un microtomo. Ojala me respondan rápido en la UAM. Muchas gracias por su ayuda Sr. José Miguel Blasco.
@@beatrizcasas41 Depende del tipo de preparación que queráis. Se puede hacer mucho más sencillo observando células enteras. Este video detalla en proceso en bastante detalle ru-vid.com/video/%D0%B2%D0%B8%D0%B4%D0%B5%D0%BE-5-ur7bWqlDQ.html. Como veis la cantidad de material y reactivos que se usa es corta. Tened en cuenta que en este caso se tiñe antes de disgregar las células. ¡Suerte!
Las imágenes son de Molecular Cell Biology. 4th edition. Lodish H, Berk A, Zipursky SL, et al. New York: W. H. Freeman; 2000. Puedes acceder online : www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK21475/?term=darnell
