Скажите существует возможность косвенной оценки количества клеток напрямую во флаконе без пересева? Возможно добавления во флакон трипановый синий для визуальной оценки умерших клеток или он оказывает цитопатическое действие и на живые клетки?
Попробовал трипановый синий на живой культуре. 10 мкл 0,4% раствора на 0,1 мл среды в лунке 96 луночного планшета. Убил часть клеток спиртом, часть оставил живыми. В принципе мёртвые красятся, но блекло - или нужна очень высокая концентрация. Живые не красятся, но начинают немного сморщиваться, думаю цитопатическое действие есть, может пот ом восстановятся. То есть вроде работает, но сомнительно. Надо поэкспериментировать с концетрациями, растворением на среде, временем экспозиции. Но это надолго.
Видео познавательное. Порекомендуйте хорошие протоколы для культивирования. Мы используем Р-р Версена и трипсин для снятия с поверхности, среда DMEM и сыворотка КРС в качестве основной среды. Флаконы 25 мл. Антибиотик с амфотерицином в по вашему совету добавлю. Может надо что-то еще?
По идее взять коллагеновую подложку, заселить клетками (фибробласты и эпителий) и добавить факторов роста, которые превратят эпителий в многослойный плоский. И пересадить, если у пациента клубокие слои с луковицами сохраненны, то собственные клетки вползут в трансплантант и тоже размножатся.
