На этом видео представлен беглый обзор метода исполнения ПЦР в реальном времени. Вся информация дана максимально поверхностно, чтобы человек, не знакомый с наукой, мог иметь представления о работе ученых.
Данное видео носит не образовательный характер, а скорее ознакомительный для любопытных людей, не знающих как раскапывают что-либо в лаборатории. Выявление патогенов происходит аналогично тому, что я показывала на клетках мыши. Если в образце есть ДНК патогена, то праймеры (которые чувствительны к определённой буквенной последовательности ДНК патогена) сядут на эту ДНК и с помощью фермента наработают много копий одного и того же участка патогена. В этой же смеси плавает краситель, который встраивается именно в эти копии, и встроившись, начинает светиться, например, зелёным. Прибор это считывает. Если патогена много, то больше зелёного свечения. Если патогена в образце нет, то и свечения нет.
Здравствуйте, планирую начать работу в лаборатории ПЦР в области растениеводства, но знаний в проведении данного метода и вообще молекулярной биологии маловато, раньше об этом даже не слышал. Может быть посоветуете что нибудь для изучения? Или очень хотелось бы увидеть максимально подробный видео обзор вашей лаборатории и проведения анализа, с объяснениями каждого шага(начинается, по-моему, с выделения днк или рнк), так сказать от А до Я. Заранее большое спасибо, ваше видео было приятно смотреть)
В целом на просторах интернета есть множество классных видео про ПЦР, особенно в англоязычных источниках. Доступно написано бывает на сайте биомолекула про теоретическую составляющую. По методу ПЦР есть даже отдельный «учебник» на русском, но там может быть сложновато для начинающего. Методы выделения РНК и кДНК можно найти на сайтах производителей наборов реактивов для выделения. Например, thermo fisher. Это позволит понять, как подобные выделения осуществлять на практике. Но если брать именно практическую часть, то сам протокол проведения данных методов зависит от оборудования вашей лаборатории, и от того, чем там люди привыкли пользоваться.
@@solnishko2380если я правильно поняла, то вопрос касается о пространственном разделении работы с нуклеиновыми кислотами и оснащением этих зон? Если так, то в идеале должно быть две-три зоны: одна-две для выделения РНК/ДНК, другая - для постановки самой ПЦР. Для выделения нуклеиновых кислот достаточно высокоскоростной центрифуги, желательно, с охлаждением, и вортекс. Для реакции обратной транскрипции и обычного ПЦР нужен амплификатор, который способен поддерживать и быстро менять температуру, а также небольшая центрифуга и вортекс (ну и для электрофореза камера, источник тока, станция проявки гелей), а для ПЦР в реальном времени - специальный амплификатор, который способен считывать сигнал в реальном времени (и опять центрифуга и вортекс). И конечно, морозильники, раздельные ламинары, УФ-лампы. Причем для РНК и ДНК (ДНК - которая уже матрица для ПЦР) нужны разные приборы (например, в одном ламинаре стоят свои центрифуга и вортекс, а во втором - свои), чтобы первичный материал не загрязнял матрицу. Один амплификатор - для реакции обратной транскрипции, второй - для ПЦР. Но не всегда все получается разделить на практике. Тогда нужно чаще деконтаминировать специальной химией.
Радостно, что есть внимательные и ответственные люди, которые могут работать супер аккуратно) что ж, данное видео далеко не идеально, но я старалась. А наконечники по возможности стараемся экономить, ведь хорошие стоят недешево. Во всяком случае, на результат эти «косяки» мало влияют, если приборы и рабочая зона чистые.
