Thank you for your question. If the RNA sample is allowed to dry naturally during the final drying step, there is a risk of prolonged exposure, which could degrade the RNA. To mitigate this risk, we dry the sample quickly by applying a temperature of about 55 degrees Celsius. This method reduces RNA damage, such as RNase contamination, and does not affect the RNA quality. We have compared various drying conditions and found that this approach helps us obtain high-quality RNA. Additionally, we continuously use RNase inactivation solution to clean laboratory tables and tools. We also minimize air circulation through air conditioners to prevent RNase contamination from spreading. When necessary, we work within a biosafety cabinet. While our experience may not cover all experimental conditions, we believe you can achieve even better results by tailoring your experiments to your specific laboratory conditions. I wish you the best in all your research.

@@CDRTtube thank you so much for your detailed explain☺️

안녕하세요, 시스템의 구성과 원리 상 외부로 증발할 가능성은 없다고 보시면 됩니다. 그렇지만 간혹 압력 해제 또는 유리 기구의 분리 등의 작업시 유기용매가 누출 될 가능성이 있으므로 그 상황에서 주의하시면 큰 문제 없으실 것이라 생각합니다. 좋은 연구 성과 거두시기를 기원합니다.

@@CDRTtube 답변감사합니다!

안녕하세요, 실험 수행하는 연구자 마다 각자의 경험에 따라 방법을 조금씩 다양하게 바꿔 진행하는 것이 일반적입니다. 침전용 salt를 넣기전 원하는 size가 아닌 단백질을 필터 등으로 걸러내거나 gradient centrifugation 등으로 먼저 걸러내는 방법도 있습니다. 물론 순서를 바꿔서 salting out을 한다음 그런 처리를 하는 경우도 있구요. 저희는 ammonium sulfate 처리시 별도의 전처리 없이 진행하고 이후 단계에서 고도화 된 정제 방법을 사용하고 있습니다. 실험 목적에 따라 방법의 변화를 고민하시면 될 것 같습니다. 좋은 결과 얻으시기를 기원 드립니다.

Thank you for your question. The recommended amount of most qPCR mix kit manufacturers is final 20ul. As a result of testing under various conditions, we found that good results were obtained even when using only half the recommended amount, so we reduced the amount by half. As a result of testing on several real-time PCR machines, there was no difference in results. However, since we did not test using all machines, we recommend that you test the equipment you own by comparing the full amount with half the amount and then check the difference. We wish you good results in all your research. thank you.

Thank you for your question. You can think of it as constantly replacing the dialysis buffer with a new one for dialysis. If our answer is insufficient, please let me know again. I wish you all the best in your research.

안녕하세요. 항상 관심가지고 영상 봐주셔서 감사합니다. 연구비로 허덕이다 영상하나 촬영하여 올렸습니다. 항상 행복 가득하시고 좋은 결과 많이 많이 나오시기를 진심으로 기원드립니다. 다시한번 깊은 감사 드립니다. ^^

Thank you for your question. When measuring ROS using FACS, the generation of active oxygen is measured based on the degree of peak movement compared to the control group. The FACS itself converts the value and displays the information. If the peak compared to the control group moves to the right, it is judged to be an increase in ROS, and if the peak compared to the control group moves to the left, it is judged to be a decrease in ROS. We wish you good results in all your research endeavors.

ru-vid.com/video/%D0%B2%D0%B8%D0%B4%D0%B5%D0%BE-QvNP3bJPzrU.htmlfeature=shared Thank you for watching. Here is the same video with English subtitles. I would appreciate it if you could check the link. I hope you always achieve good research results.

질문 감사드립니다. 우선 50mM buffer제조시 연구자 마다 관점의 차이로 sodium phosphate monobasic과 dibasic을 넣어주는 양이 달라질수 있습니다. 어떤 실험실은 일정량의 mono-, di- basic을 50mM의 Na 를 기준으로 시약을 넣고 pH를 맞추기도 하고, 어떤 실험실은 mono 혹은 di basic의 조합이 pH6.5에 가깝게 되도록 전체를 기준으로 50mM을 정하기도 하죠. 그리고 일부의 연구실은 Sodium phosphate dibasic heptahydrate를 쓰기도 하는 경우가 있으니 정확하게 지금 계시는 실험실에서 보유하신 시약의 분자량을 통해 계산하시면 됩니다. 연구자 마다 경험치가 달라서 발생하는 현상으로 보시면 됩니다. 가장 확실한건 현재 보유하신 시약의 분자량 기준으로 판단하시면 되세요. ^^

안녕하세요. 이 방법을 통해 분리된 mitochondria는 일반적으로 activity를 지닌 상태로 존재합니다. 물론 여기에는 연구자의 기술과 숙련도가 중요하게 작용할 것 같습니다. 만약 kit 등으로 mitochondria를 분리하실 경우 조금더 안정적으로 분리가 가능하십니다. 수행하시는 모든 연구에서 좋은 결과 얻으시기를 기원 드립니다. ^^

tris 는 1M pH 7.2 기준으로 만들어진건가요?

@@user-ct5sb5ko9w안녕하세요, 시청해 주셔서 감사드립니다. 실험 기법은 각 연구자 마다 경험 및 결과 만족도에 의해 다양하게 달라질 수 있습니다. 저희 영상의 내용도 그와 동일하다고 이해해 주시면 좋겠습니다. 보통 dialysis할때 동일 buffer를 사용하여 salt 제거를 하는 방법도 있으나, 단백질 추출시 사용한 buffer와 dialysis할때 사용하는 buffer를 서로 다르게 만들어 사용하는 방법이 있습니다. 동일 buffer를 사용하면 salting out 등을 통해 확보된 단백질에서 salt가 제거되는데, buffer를 서로 다르게 사용하면 salt를 포함한 buffer조성물이 같이 이동하며 salt를 더 빠르고 깔끔하게 제거할 수 있다는 이론도 있습니다. 저희 실험실은 그 경험이 있기 때문에 이렇게 방법을 정해서 사용하고 있습니다. 그렇지만 kinase 등의 연구 등 phosphate의 변화가 있으면 좋지 않은 경우 등, 실험 목적에 따라 동일 buffer를 사용하거나, lysosome 단백질 연구 등을 위해 pH를 낮춰 dialysis buffer를 제조하는 등 변화를 주는 방법도 사용하고 있습니다. 두가 질문에 답이 되었다면 좋겠습니다. 추가 궁금사항이 있으시면 언제라도 질문 주시면 감사하겠습니다. 수행하시는 연구 모두에서 최고의 성과 거두시기를 기원드립니다. ^^

정말 상세한 답변 감사합니다. 제가 단백질 추출을하고 salting out 으로 정제하는 연구를 진행하고 있습니다. 해당 영상으로 어떻게 마무리를 해야하는지 알겠어요! 제가 PBS buffer pH를 7.4 로 제조는 했는데 tris puffer제조를 어떻게 해야할지 고민중이라.. 동일하게 pH 을 만들어야할까요? 조언 부탁드리겠습니다!

@@user-ct5sb5ko9w 안녕하세요 pH변화는 단백질의 net charge를 변화 시킬수 있으므로 세포내 소기관 중 pH가 상이한 곳의 단백질 연구를 위해서는 해당 pH를 선택하시는 것이 좋지만, 그렇지 않은 일반적 단백질의 경우 가장 보편적인 pH를 선택하시는 것이 좋겠지요. pH7.4로 PBS를 사용하신다면 그리고 일반적인 세포내 pH조건의 단백질 연구를 하신다면 Tris buffer 역시 pH를 7.4로 사용하시는 것이 좋다고 생각합니다. 하나하나 연구가 진행되면서 즐거운 결과들이 나오고, 그것을 기반으로 훌륭한 연구자가 되실 것이라 생각합니다. 좋은 결과 많이 도출되시기를 기원드립니다.

Thank you for your question. Let me explain based on my understanding of the question. 1. We are going to salt out NaCl to a final concentration of 0.9M. However, without understanding the meaning of final concentration, should I use salt directly or make a NaCl solution first? So what molarity should you use? -> It is thought that the final 0.9M NaCl is added to the protein solution to salt out the protein. Therefore, considering the volume of the protein solution and the molecular weight of NaCl, it would be best to add NaCl powder to the protein solution by mixing it well with a magnetic stirr. If you add NaCl solution to the protein solution, make the same volume of 1.8M NaCl solution as the protein solution and mix 50:50 to make the final 0.9M. 2. And how long should I add the salt? How do I know when saturation has been reached? -> It is recommended that salt in powder form be added slowly. There is no specific time, but in our case, we add additional powder after confirming that the small amount of powder has been properly dissolved. However, protein denaturation occurs when heat is generated, so it is recommended to be careful not to increase the temperature. 3. Since I need to perform dialysis against 0.1M acetic acid after salting out, should I activate the dialysis membrane so that the dialysate buffer is 0.1M acetic acid? -> There is a method recommended by the manufacturer to activate the dialysis membrane. We recommend that you follow it. If you cannot confirm, please contact your dialysis membrane manufacturer by e-mail and they will be able to guide you on the best activation method. When we mainly dialyze protein solutions, we activate the dialysis membrane with distilled water because we follow the method recommended by our dialysis membrane manufacturer. I hope you achieve good results in all your experiments.

Thankyou so much for your reply.. I am having 150 ml of solution in which I need to add salt to salt out protein of interest.. So i read somewhere that if I calculate the grams of NaCl require to salt out protein by taking the volume as 150 ml (bcoz this is the volume in which I need to add salt) therefore 0.9M × 150ml × 58.44 divided by 1000 which comes out to be 7.89 grams. Therefore I need to add 7.89g of salt little by little to my solution. Is that right?

@@aimanalvi9159 I'm sorry for late reply. I was late in checking comments due to the seminar. Looking at the information you wrote, if you add 7.89g NaCl to 150ml solution, it becomes final 0.9M. thank you :-)

Ohh don't be.. I appreciate your efforts.. Thankyou so much once again for your time and knowledge.

안녕하세요, 영상 시청해주셔서 감사합니다. 연구자 마다 의견이 상이할 수 있으나, sample buffer와 dialysis buffer를 다르게 사용할 경우 buffer간 이온의 농도차이가 발생하여 dialysis 효율이 좋아지는 경우가 있습니다. 저희 실험실은 이러한 의견들을 참조하고 경험을 기반으로 이와같은 방법을 주로 사용하고 있습니다. 서로 다른 버퍼가 아닌 동일 버퍼를 사용하는 실험실도 많으므로, 저희 방법을 "여러 가지 종류 중 한가지 실험방법"으로 봐주시면 좋겠습니다. 수행하시는 연구에서 모두 좋은 결과 얻으시기를 기원드립니다. 감사합니다.

@@CDRTtube 헉 친절한 답변 감사합니다 추운 겨울 감기 조심하세요!

An English version of the video has already been uploaded due to many people requesting it. I would appreciate it if you could check the link below. I wish you good success in all your research. ru-vid.com/video/%D0%B2%D0%B8%D0%B4%D0%B5%D0%BE-QvNP3bJPzrU.htmlfeature=shared

안녕하세요~ 영상 3분 쯤 확인해 보시면 농약의 함량에 따라 색상이 변하는 것을 확인하실 수 있으십니다. 농약이 많을수록 백색이되고 농약이 없으면 청색이 나옵니다. 또한 농약의 잔류량에 따라 청색이 흐리게 변하는 것을 보실수 있으실겁니다. 추가로 궁금하신 점이 있으시면 언제라도 질문주세요. ^^

안녕하세요, 글 남겨주셔서 감사합니다. 다양한 실험을 올려드려야 하는데 죄송합니다. CRISPR-Cas9 도 수행했었는데, 현재 3D bioprinting 쪽 추진중이어서 우선 현재 추진중인 프로젝트 마무리 되면 3D bioprinting 영상 쪽 작업을 하려고 생각 중입니다. 연말 전 후까지는 최대한 작업이 가능하도록 진행해 보겠습니다. 이후 gene editing 쪽도 기회 만들어 보겠습니다. 좋은 말씀 주셔서 감사드립니다. 항상 건강하시고 행복 가득 하세요. ^^

Thank you for your kindness. :-)

Thank you for watching. You can use our videos in your school projects as long as the source is open. We hope to advance research in the field of biotechnology through the exchange of various information among many people. thank you.

Yes, in order to respond to specific situations such as pH measurement, when adding reagents, instead of adding 1 final liter at a time, add approximately 800 to 900 ml of distilled water, measure the pH, and if there is no problem, add distilled water to make the final 1 liter. I wish you good results in all your research. ;-)

안녕하세요 질문 감사드립니다 이미 우리는생명공학적인 기법으로 발견 된 다양한 결과물을 통해 인간의 평균수명이 늘어왔습니다 의약품 개발 또는 백신 등이 그 예가 되겠지요 다양한 윤리적적인 이슈 등이 있지만 앞으로도 지속적인 생명공학 기술 활용을 통해 인간의 건강과 복지를 증진시키는 시도가 계속 되리라 생각합니다 감사합니다 ^^

안녕하세요, 질문 감사드립니다. 실험목적에 따라 Triton X-100 등의 처리를 통해 세포 내부로 형광염색 시약을 넣는 경우도 있습니다. 본 실험은 세포가 살아있거나 죽은 상태의 차이를 보는 실험이므로 별도의 Triton X-100 또는 Tween 20 등의 시약 처리 없이 진행된 것입니다. 수행하시는 연구 모두 좋은 성과 도출되시기를 기원 드립니다.

안녕하세요, 질문 감사드립니다. Dialysis 할때 membrane내에 용액을 절반정도 채우고 나머지 50%의 부분이 팽창하며 버퍼 교환이 발생해야 하는데, 이때 membrane이 회전을 하게 되면 꼬이면서 비어있는 부분이 팽창하지 못합니다. 그리고 심한경우 membrane이 찢어지는 일도 간혹 발생할 수 있습니다. 결국 dialysis 효율이 감소되고 심한경우 membrane 손상이 발생할 수 있어 회전을 시키지 않도록 고정시키는 것입니다. 수행하시는 연구 모두 좋은 성과 거두시기를 기원 드립니다. ^^

Thank you for question. PBS works as an isotonic solution, The NaCl and KCl in PBS help to maintain the osmotic pressure of the solution which can prevent cellular damage. Also NaCl and KCl gives a buffering capacity, maintain the electrical neutrality of the solution, and providing ions that can interact with intracellular molecules. Hope you have a great results.

안녕하세요, 질문 감사드립니다. 세포를 수거한 뒤, 바로 lysis를 하지 않고 보관하실 경우 용액 (media, PBS 등)은 최대한 제거하고 pellet만 보관하시는것이 좋습니다. PBS에 세포가 들어있는 상태로 보관하게되면 냉각과정에서 얼음결정 등의 요인에 의해 세포가 상당히 많이 파손되고, 다음단계의 진행이 불가능한 상태가 발생하게 됩니다. 진행하시는 모든 연구에서 좋은 성과 거두시기를 기원 드립니다. ~ ^^

안녕하세요~ 질문 감사드립니다. 실험을 진행할때 세포마다 ROS를 발생시키는 양과 스트레스에 반응하는 정도가 조금 다를수 있습니다. 저희 연구팀에서도 필요시 세포를 떼어내서 형광물질을 투입하는 경우도 있습니다. 본 영상의 경우 부착된 상태에서 형광물질 처리후 측정이 가능한, 즉 ROS를 상대적으로 안정적으로 지닐수 있는 세포를 사용했기때문에 세포가 붙어있는 상황에서 형광물질 투입이 진행된 것으로 보시면 됩니다. 수행하시는 모든 연구에서 좋은 성과 거두시기를 기원드립니다. ^^

안녕하세요, 질문 감사드립니다. 농약성분 중 일반적으로 사용되는 organophosphorus와 carbamate 계열 살충제의 검출이 가능한 것이 이 키트이며, 잔류농약이 없을 경우 cholinesterase가 발색제에 작용하여 진한 색을 띄게 되고 잔류농약이 있을 경우 cholinesterase가 살충제와 반응하여 발색이 되지 않는 원리 입니다. 감사합니다.~ ^^

살충제 외,풀약 계열은 검출 안되나요?

도움이 되셨다니 기쁩니다. 수행하시는 연구에서 최고의 성과 나오시기를 기원드립니다. 항상 건강하세요~ ^^

질문 감사합니다. 세포 용해시 사용하시는 버퍼는 말씀하신 potassium phosphate buffer도 상관 없습니다. 계면활성제를 넣지 않는 경우 거의 모든 버퍼를 사용하셔도 세포용해는 잘 됩니다. 진행하시는 모든 연구에서 훌륭한 결과 얻으시기를 기원드립니다. ^^

안녕하세요, 질문 감사드립니다. 사용하시는 제품이 동일하다면 Customize 선택이 가능하실것 같은데 혹시나 선택 옵션 등에 대해 아래 전화번호로 문의해 보시면 좋을 것 같습니다. 메카시스 제조사의 제품설명에 나온 전화번호 입니다. ※상기 제품에 대한 상담은 기술영업팀 (042)485-0118 (연결번호: 1)로 문의 바랍니다. 수행하시는 모든 결과에서 최고의 성과 거두시기를 기원드립니다.

안녕하세요~ 질문 감사드립니다. 실온 또는 4도 조건에서 투석을 하시면 되십니다. 그렇지만 초반에는 투석시 교체되는 salt의 양이 많기 때문에 실온에서 버퍼를 자주 교체해 주고 어느정도 salt교체가 이뤄지면, 장시간 투석을 하는것이 dialysis의 효율을 높이므로 단백질 변성 및 미생물 생장 등을 방지하기 위해 4도 조건에서 해주는 방법을 사용합니다. 수행하시는 연구에서 모두 좋은 결과 나오시기를 기원드립니다.

안녕하세요, 질문 감사드립니다. 저희는 바인더용 속지 비닐을 사용합니다. 저렴해서 자주 바꾸는게 좋더군요. 도움이 되시면 좋겠습니다. 수행 하시는 모든 연구에서 좋은 성과 거두시기를 기원 드립니다. ^^

@@CDRTtube 감사합니다 ㅎㅎ

We wish you good results in your research.

Thank you for watching. We wish you good results in all your research.

ru-vid.com/video/%D0%B2%D0%B8%D0%B4%D0%B5%D0%BE-QvNP3bJPzrU.html Thank you for watching. We have already created and uploaded an English version of this video. Please check the address above. We wish you always good results.

Thanks for the question. No specific ratio exists when cells are lysed with this experimental method. This is because each cell has a different specificity, and there is a reason why each cell has a slightly different size. However, if you try adding about 1.5 to 2 times more PBS than the size of the cell pellet left after centrifugation, you will get good results. We hope that all the research you are doing will produce good results.

ru-vid.com/video/%D0%B2%D0%B8%D0%B4%D0%B5%D0%BE-rZeauP75pe0.html Thank you for watching. We uploaded the English version video you requested. Please refer to the address above. We look forward to good results from all of your research.

Thanks for watching. We wish you the best in your research. Thank you. :-)

안녕하세요~ 질문 감사드립니다. 세포의 특성에 따라 배지를 넣고 trypsin을 deactivation 시키는 neutralization을 하는 경우도 있고, 바로 ROS를 확인하는 경우도 있습니다. 어떤 세포의 경우 시간이 지체될때 ROS 차이를 확인하기 어려운 경우도 발생하니까요. 진행하시는 연구 모두 훌륭하신 결과 나오시기를 기원드립니다. 감사합니다~

Thank you for watching. We will create and upload an English translated version. Sorry for the delay due to a research project currently in progress.

안녕하세요~ ^^ 실험기법 추가되는 것 있으면 바로 영상제작해서 올리겠습니다. 항상 건강하세요~ ^^

컨텐츠가 부족하시다면 CAR 형질전환에 대해서 다뤄주시면 재밌겠네요~

@@user-wr1rh4nt1d 항상 관심가져 주셔서 감사합니다. ^^ CAR 기법과 관련하여 저희 연구실에서는 현재 다루지 않고 있습니다. 나중에 CRISPR 나 prime editing쪽 영상을 만들 예정입니다. 감사합니다~~ ^^

안녕하세요 영상 시청해주셔서 감사합니다 말씀해 주신 대로 하셔도 됩니다 더 좋은 영상들이 많은데 저희 채널 영상을 참고해 주셔서 감사드리구요 항상 건강하세요 ^^

안녕하세요~ 질문 고맙습니다. 이 실험을 위해 다양한 protocol이 존재하며 그중 phosphate buffer를 사용하는 실험방법도 있습니다. 충분히 사용 가능하실 것이라 생각합니다. 진행하시는 연구 모두 좋은 결과 나오시기를 기원드립니다. 감사합니다~~

@@CDRTtube 감사합니다!

안녕하세요! 영상 보고 프로토콜 참고하여 실험중에 있습니다! 실험 중 궁금한 사항이 생겨서 다시 댓글 남깁니다ㅎㅎ Cell lysis 할 때 ice에 박고 vortexing 하는 것만으로 충분하지 않은지 끈적거리는데 sonication 해도 문제가 되지 않을까요? (Somication 했을 때 밴드가 나오긴 했지만 실험상 이렇게 해도 되는 건지요..) 또 native page가 아닌 non reducing sds page만 해도 되는 건지도 궁금합니다..ㅎㅎ

@@user-xo9gs1ot8q 안녕하세요~ 질문 감사합니다. Cell lysis 시 끈적거린다면 아마 pellet 대비 cell lysis buffer양의 비율이 충분하지 않았을 가능성이 있습니다. Cell lysis buffer 조성을 한번 확인해 보시고 이상없으시다면 lysis buffer양을 조금 올려보시면 될 듯 합니다. Sonication을 잠깐 해도 실험결과에 큰 영향을 미치지는 않습니다만, cell lysis buffer만으로도 용해가 문제없으시다면 불필요한 실험단계의 추가는 연구자의 피로도를 올릴수 있고 샘플이 많을 경우 실험진행에 지체가 되므로 연구자님께서 잘 판단하셔서 진행하시면 좋을 것 같습니다. 가장 단순한 방법이 연구하시는 분께 유리하니까요. 그리고 저희 방법은 cell loading dye는 non-SDS를 사용하지만, gel 은 SDS가 들어간 SDS-PAGE를 사용합니다. Tyrosinase는 SDS-PAGE gel에서 전기영동을 해도 실험결과에 영향을 크게 받지 않는 효소로 알려져 있습니다. 진행하시는 실험 모두 좋은 결과 나오시기를 기원드립니다. 감사합니다.

Thanks for the nice comment. Naturally, researchers must be extremely careful when re-capping. Even an experienced researcher can accidentally poke a needle at himself. I wish you the best results in all your research. Thank you so much ;-)

안녕하세요, 질문 감사드립니다. 트립신에 민감한 세포의 경우 약간의 비용이 들지만 가장 많이 권하는 방법으로는 TrypLE reagents를 사용하는 것을 권해드립니다. 그나마 손상을 최소화 하면서 늘 쓰던 방법과 동일하게 사용하면 되니까요. 만약 물리적으로 세포를 떼어내야 한다면 배지 수압을 강하게 하여 쓸어내리는 방법을 사용하는데 회수하는 효율, 그리고 세포의 특성에 따라 회수가 안되는 경우도 있어서 특별하게 권해드릴 만한 방법은 아니라고 판단됩니다. 수행하시는 연구에서 좋은 결과 나오시기를 기원드립니다.

안녕하세요~ 질문 감사드립니다. 예전에 불가능하다고 인식되었던 것이 생명공학기술의 발달로 가능해진 것들이 많습니다. 이종교배 또는 유전자 변형 등의 방법을 통해 여러가지 목적에 맞는 생명체가 만들어 진 적도 있습니다. 예로 cama (수컷 camel 과 암컷 llama)가 있습니다. 맘모스 복원 같은 연구 및 시도 등 다양한 연구 또한 진행되고 있습니다. ^^ 당장은 아니더라도 수요와 시도가 계속 된다면 언젠가 결과물이 발생될 것으로 기대해 봅니다.~

Thanks for the question. We are using an Oilless Pump that does not require an oil change. You can use any product, and we use a "GAST vacuum pump" equipped with a pedal on/off switch. We wish you good luck in all your experiments.

Thanks for the question. We use distilled water. If you have any questions, feel free to ask :-)